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细胞培养板的选择和使用——百欧博伟生物

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-06-12  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司  作者:百欧博伟  浏览次数:27
核心提示:细胞培养板的选择和使用
          细胞培养板的选择和使用——百欧博伟生物

 

一、细胞培养板

 

细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具,形状、规格、用途多样。

 

你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫?

 

你是否正为如何方便、正确使用培养板而苦恼?

 

你对如何处理培养板是否也有困惑?

 

对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会?

 

二、细胞培养板的选择

 

1)细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);

 

2)培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;

 

3)根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。

 

三、平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择

 

1)贴壁细胞一般用平底培养板。

 

2)悬浮型细胞的培养一般用V型。

 

3)U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。

 

4)V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。

 

四、不同型状的板子自然有不同用途

 

平底的什么类型的细胞都可用,但当细胞数目较少,如做克隆时,就用96孔平底板。

 

另外,做MTT等实验时,无论贴壁和悬浮细胞,一般均用平底板。

 

至于U或V型板,一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面,当做两种不同淋巴细胞混合培养时,需要二者相互接触以刺激。因此,一般需要U型板﹐因细胞会由于重力的作用而聚集在一个很小的范围內,V型板的用途更少,一般用于细胞杀伤实验时,为了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种实验也可用U型板替代(加入细胞后﹐低速离心)。

 

如果是养细胞的话, 通常是运用平底的, 另外要特別注意材质, 标示"Tissue Culture (TC) Treated"就是养细胞用的。

 

圆底的通常是拿来做分析, 化学反应, 或是保存样品用。因为圆底比较好将液体吸得干净, 如果用平底的就不好吸了。 不过, 如果你是要测吸光值的话, 一定要买平底的才行。

 

大部分细胞培养都用平底培养板,便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致,还便于MTT检测。

 

圆底培养板主要用于同位素掺入的实验,需要用细胞收集仪收集细胞的培养,如“混合淋巴细胞培养”等。

 

如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子

 

()操作步骤

 

⒈加样品:将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔),将待检血清用PBS或生理盐水按1:20稀释后取10ul加入反应孔内。

 

⒉加对照:加入阴性对照1-3孔,阳性对照1孔,各100ul对照血清。空白对照1孔空置。

 

⒊温育:将反应板震荡使样品混匀后,置37℃温箱或水浴反应20分钟。

 

⒋洗板:用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。(1)手洗:将反应板孔内容物倾出,将洗涤液注满反应孔,放置30秒钟后用力甩去,如此重复5次后拍干。(2)机洗:5次,每孔注入洗涤液200ul或注满,停留30秒钟后吸尽拍干。

 

⒌加酶标工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液,置37℃温箱反应20分钟后,洗板5次,洗板操作同步骤4。

 

⒍显色和终止反应:将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内,37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。

 

()结果判定

 

⒈酶标仪设定波长450nm,先用空白调零,然后测定各孔OD值;如果选用双波长测定,不必设置空白对照孔。

 

⒉当阴性对照平均OD值小于0.08,阳性对照(pc)OD值大于0.30时,说明试剂盒有效且实验操作正确,否则应当重复试验。

 

⒊临界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+阴性对照平均(NC)OD值(当阴性平均OD值小于0.05时,按0.05计算;当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算)。

 

⒋标本OD值≤临界值为阴性,标本OD值>临界值为阳性。

 

常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量:不同孔板所加培养液的液面都不宜太深,一般在2-3mm范围,结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换,而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

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